双缩脲试剂原理具体如下：

　　双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时(多肽)，试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

　　双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜，而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境，因此它可被其他碱，如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾，可延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。

　　另外，在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液，再加入氢氧化钠[NaOH]溶液，则无法充分制造碱性环境，此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的。

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