荧光定量pcr试剂：通常有用sybrgreenmix做的，但是这里建议你用evagreen做，灵敏度和平行性都要好于sybrgreen，并且如果你那是abi或者stratagene的pcr如果用sybrgreen还需要加一步rox很麻烦。

　　PCR检测是指将微量DNA片段进行大量扩增，以便进行结构和功能分析。PCR即聚合酶链反应，其原理是在体外模拟体内DNA的复制过程。

　　PCR试剂的污染是什么？

　　出现污染后，我们首先考虑可能是试剂的污染，更换新批号的HBV试剂重新检测后，结果仍为全部标本阳性。

　　将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测，结果标本中阴、阳性结果都有，阴性对照是阴性，阳性对照是阳性，说明标本没有被污染将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测，也显示试剂没有问题。我实验室用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉，再将HBV标本进行检测，结果全部标本仍然为阳性。

　　用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将HBV标本重新检测，同时设置了两个阴性对照(A和B)，A阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿，打开反应管的盖子，在空气中暴露10min，盖上盖子，上机检测；B阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿，不开盖子，直接上机检测。

　　结果是全部标本和A阴性对照为阳性，而B阴性对照为阴性。至此，虽然还查找不到污染源是什么，但有一点可以肯定，PCR实验室污染是气溶胶扩散而引起的后来经过调查，发现污染是由于本室工一位工作人员在打扫实验室卫生时，用扩增区的扫笤和拖把打扫了标本制备区的卫生引起。

　　在确定了污染的原因后，我们就开始着手排除污染，每天都打开整个PCR实验室的门窗和排气扇，让整个实验室通风，用消毒液擦拭整个PCR实验室，打开所有的紫外灯照射。

　　每隔3d按3．5步骤检测一次，一直这样处理了一个月，A阴性对照才转为阴性。

　　连续检测三次A和B阴性对照，每次结果都均为阴性，才确定PCR实验室恢复正常。通常我们对PCR实验室污染的预防是采取隔离不同操作区、分装试剂、改进实验操作等规则，对污染的处理是用稀盐酸擦拭或浸泡；紫外线照射法等]。

　　而对于实验室的通风方面没有给予足够的重视，为了防止实验区间之间的相互污染，各个实验区间都是尽可能的密闭，从而使得实验室出现PCR产物残留污染的几率增大。从本次PCR实验室污染排除的过程来看．我觉得污染得以排除的一个关键是通风。

　　适当的给予实验室通风，可起到空气稀释的作用，有利于PCR产物残留量的减少，加快实验室污染的排除。

标签：实验室污染试剂阴性检测