克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA序列）有关的元件即成为表达载体。

如启动子（Promoter）、核糖体结合位点（RBS）、终止子等。

表达载体又分为过表达载体、干扰表达载体和正常表达载体三种。

基因过表达（gene overexpression）是将目的基因CDS克隆到相应的质粒或病毒载体上，利用载体骨架上构建的调控元件，使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译，从而实现目的基因的过表达。

RNA干扰是在强组成型启动子下游插入反向重复片段的重组双元载体。

在RNAi载体中，目标基因的cDNA片段被克隆在间隔序列(spacer)的两端，这些片段通过头头相连或尾尾相连导致该转基因产生自我互补的hpRNA(分子内dsRNA)结构，可以特异将特定基因沉默，从而获得特定基因的功能丧失或者基因表达量降低。

正常表达载体和超表达载体组成：

（1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。

原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。

而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点；

（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+等；

（3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段；

（4）启动子促进 DNA 转录的 DNA 序列，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码序列的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。

增强子为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。

其作用与增强子所在的位置或方向无关。

即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。

沉默子－负增强子，负调控序列；

（5）核糖体结合位点（RBS，Ribosome-binding site）是mRNA分子5'（上游）的区段，能够结合核糖体正确定位至翻译启始位点，也能够控制mRNA翻译启始的准确度和效率。

（6）Terms 终止信号；

（7）加 poly（A）信号，可以起到稳定 mRNA 作用。

RNAi表达载体组成：

（1）正义基因片段：目的基因CDS片段200 bp左右特异性正向片段；

（2）反义基因片段：目的基因CDS片段200 bp左右特异性反向片段（与正义片段序列碱基互补配对，方向不同）；

（3）内含子：用于在转录时通过拼接产生功能性间隔(spacer)内含子介导基因沉默。

（4）载体上其他元件类型同上。

注意：

其实，构建表达载体与构建克隆载体的实验方法并无区别，具体实验流程可参考载体构建入门攻略——克隆载体篇，需要注意的是目的基因插入到表达载体以后可以正确翻译。

这就需要在设计载体时进行自检。

l 酶切位点自检：如果进行计划使用酶切酶连方法进行载体构建，可以使用DNAMAN，Snapgene等软件对目的基因序列进行限制性酶切位点分析，检测选择的酶切位点在目标序列中存在。

如果使用同源重组方法进行载体构建，则无需考虑酶切位点的影响。

l 避免使用同尾酶：同尾酶是不同的酶，同尾酶之间的识别序列可以相同也可以不同，但产生相同的粘性末端，使用同尾酶造成的结果是片段插入载体的方向不固定，插入方向错误会导致无法正常表达翻译。

l 避免移码，将片段按照预期插入到表达载体序列中，从预期的ATG开始翻译，检查目的片段是否移码，翻译是否正常终止，再加上保护碱基。

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